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怎樣測定花生粕和豆粕用定氮儀測定粗蛋白含量

更新時間:2011-01-18  |  點擊率:4273

用上海沛歐定氮儀怎樣測定花生粕和豆粕用定氮儀測定粗蛋白含量?

       用于測定有機物的含氮量,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時,則可用此法測定樣品中蛋白質(zhì)的含量。當?shù)鞍踪|(zhì)與濃硫酸共熱時,其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水,而氮則轉(zhuǎn)變成氨,并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是,這個反應(yīng)進行得比較緩慢,通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應(yīng)液的沸點,并加入硫酸銅作為催化劑,以促進反應(yīng)的進行。消化完成后,在凱氏定氮儀中加入濃堿,可使消化液中的硫酸銨分解,游離出氨,借助水蒸汽蒸餾法,將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨與溶液中氫離子結(jié)合,使溶液中的氫離子濃度降低,指示劑顏色改變,然后用標準無機鹽酸滴定,直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。蛋白質(zhì)的含氮量為16%,即1克蛋白質(zhì)中的氮相當于6.25克蛋白質(zhì),用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。

1 實驗材料 1.1 器材    上海沛歐SKD-100定氮儀 、消化爐SKD-08S2    1.2 試劑2 實驗步驟
實驗材料
器材
上海沛歐凱氏定氮儀 1套(SKD-08S2消化爐可以任意選擇消化孔數(shù),而不影響熱量散失);
300ml凱氏燒瓶 4個;
移液管;錐形瓶;
試管;
小玻璃珠
試劑
98%濃硫酸分析純;
35%氫氧化鈉溶液;
2%硼酸溶液;
標準鹽酸溶液(0.01mol/L)。
粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物 :K2SO4與CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。
混合指示劑(田氏指示劑):由50ml 0.1%甲烯藍乙醇溶液與200ml 0.1%甲基紅乙醇溶液混合配成,貯于棕色瓶中備用。
樣品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
實驗步驟
安裝凱氏定氮儀。
        消化:取4個300ml凱氏燒瓶并標號,各加1顆玻璃珠,在1號及2號瓶中各加樣品1ml,催化劑(K2SO4- CuSO4·5H2O)200 mg,濃硫酸5 ml。注意加樣品時應(yīng)直接送入瓶底,而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1 ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸,作為對照。在通風櫥內(nèi)進行消化。在消化開始時應(yīng)控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當加強火力,繼續(xù)消化,直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力,冷卻至室溫。 (上海沛歐SKD-08S2消化爐可編程設(shè)定消化爐消化樣品的升溫曲線)
蒸餾:
       蒸餾器的洗滌:用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀,在蒸汽發(fā)生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑,用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后,在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶,繼續(xù)蒸汽洗滌2分鐘,觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色,如不變色則證明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。移走錐形瓶,停止加熱,打開夾子。 (沛歐skd-100可以設(shè)定清洗程序)
蒸餾:設(shè)定取30%的氫氧化鈉溶液10ml,向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml稀釋液,設(shè)定蒸餾時間5分鐘,開始蒸餾。氨氣進入錐形瓶,瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續(xù)下一個蒸餾操作。待樣品和對照均蒸餾完畢后,同時進行滴定。
滴定:用0.01mol/L的標準鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量,硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點。
結(jié)果計算:

其中:

A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數(shù);

B為滴定對照液用去的鹽酸溶液平均ml數(shù);

C為所取樣品溶液的ml數(shù)。